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怎么挑選到合適自己試驗的抗體
發(fā)布時間： 2017-10-20 點擊次數(shù)： 1455次一、關(guān)于特異性的挑選：特異性的挑選首要需求考慮四個方面：蛋白特異性、種屬特異性、試驗辦法特異性、符號物的特異性。
1、蛋白特異性：針對需求檢測的蛋白查找抗體，幾個細(xì)節(jié)要差異，重組表達(dá)的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測，對抗體的要求是不一樣的，留意檢查抗體闡明書的檢測闡明。如果重組蛋白不是全長表達(dá)，則需求留意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。內(nèi)源性蛋白能清楚其剪切與潤飾的辦法，特別表型的蛋白需求進(jìn)行序列比對，并結(jié)合抗體免疫原序列，檢查穿插反響的狀況。磷酸化蛋白檢測需求斷定詳細(xì)位點，不同位點的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在，不宜混為一談。
2、種屬特異性：同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。現(xiàn)在大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或規(guī)劃多肽抗原的，依據(jù)蛋白的同源性的狀況與其他種屬發(fā)作穿插反響。需求參照闡明書注明的可反響種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體，能夠經(jīng)過蛋白的序列比對，挑選同源序列免疫的抗體，不過一般這種狀況生產(chǎn)商不會受理其關(guān)于質(zhì)量的申述，如果能夠申請到免費的抗體樣品，則利于抗體挑選。
3、試驗辦法特異性：現(xiàn)在運(yùn)用抗體的試驗辦法有許多，不同的運(yùn)用辦法過程中，由于對蛋白樣品的處理辦法不一樣，蛋白的含量有差異，對抗體的辨認(rèn)表位和效價要求都是不一樣的。詳細(xì)的依據(jù)闡明書注明的產(chǎn)品應(yīng)用辦法進(jìn)行挑選。可是生產(chǎn)商一般不會將每個抗體都進(jìn)行各種試驗的檢測，現(xiàn)在檢測比較多的僅僅WB、IHC、IF等，如果針對詳細(xì)的試驗辦法沒有找到適宜的抗體的，能夠結(jié)合蛋白序列剖析和抗體的抗原信息，挑選盡可能有作用的抗體。相同，申請到免費的抗體樣品是個很好的途徑。
4、符號物的特異性一般依據(jù)試驗操作的試驗辦法不會運(yùn)用帶有符號的一抗，比方WB、IHC等，都是經(jīng)過二抗類的試劑符號到達(dá)成果出現(xiàn)的意圖。可是依據(jù)儀器剖析的一些試驗，可能就會運(yùn)用到直接符號的一抗，比方流式試驗。那么需求了解到自己即將運(yùn)用的儀器能檢測到的熒光規(guī)模，不通的參數(shù)要求挑選對應(yīng)的符號物。在免疫熒光雙標(biāo)試驗中，需求選配不同的熒光物。
二、抗體種屬來歷的挑選：有人認(rèn)為單抗比多抗好，其實這并不是一個謹(jǐn)慎的觀念，只能說在可能性上單抗的特異性更好一些，而多抗的親和力會優(yōu)于單抗，而且特異性并不必定就遜于單抗，首要看抗原的規(guī)劃水平。現(xiàn)在商品化抗體里單抗首要是鼠單抗、兔單抗，多抗首要是兔多抗、山羊多抗等，其他種屬來歷抗體較少。不主張糾結(jié)于單抗好仍是多抗好，能做出試驗的抗體就是好抗體。在挑選上一般主張試驗種屬和抗體種屬親緣性越遠(yuǎn)越好，不宜同源。抗體不同種屬會要影響接下來二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標(biāo)試驗中，需求在差異于試驗種屬的基礎(chǔ)上，差異開兩個目標(biāo)的抗體種屬來歷，以便于二抗差異辨認(rèn)。
三、關(guān)于性價比的挑選：抗體的質(zhì)量凹凸zui終仍是需求經(jīng)過試驗成果來出現(xiàn)的，可是在挑選抗體之前我們并無法準(zhǔn)確判別抗體的作用怎么。不論什么品牌的，不論進(jìn)口仍是國產(chǎn)的，都會有用得不錯的產(chǎn)品，也都會有做不出來的產(chǎn)品。抗體歸于異質(zhì)化產(chǎn)品，不同品牌之間，乃至同一品牌的不同產(chǎn)品之間，抗體質(zhì)量差異都較為明顯，而且沒有統(tǒng)一的衡量標(biāo)準(zhǔn)。這是抗體挑選中zui難的一個問題。許多人習(xí)慣于依據(jù)試驗室傳統(tǒng)認(rèn)識或參考文獻(xiàn)上運(yùn)用的產(chǎn)品進(jìn)行挑選，可是由于不同批次間的抗體作用也是有差異的，所以并不能*保證正確挑選。在這種狀況下，抗體的售后就尤為重要，遇到抗體質(zhì)量障礙時，能夠保證有效地解決問題，不至于影響試驗的發(fā)展。現(xiàn)在有部分品牌能夠供給免費的抗體小樣的，無疑對這個問題是一個很好的解決方案。先斷定抗體是否合適自己的試驗，能夠防止由于抗體質(zhì)量投訴耽擱試驗組織。在價格方面，需求謹(jǐn)記，zui貴的不必定就是的，zui合適你的試驗的才是的。花許多錢買到很貴的抗體，再花上很長的時刻去投訴的狀況并不罕見。只買對的，不買貴的。在挑選價格的時分還要留意標(biāo)準(zhǔn)大小、抗體濃度、效價規(guī)模等，要歸納考慮。在標(biāo)準(zhǔn)方面，依據(jù)zui終能夠稀釋成的工作液的量的來衡量更為準(zhǔn)確。許多老品牌供給的抗體產(chǎn)品基本都是以大包裝為主，就單個課題的試驗而言，過大的包裝有時會形成很大的浪費。現(xiàn)在Proteintech、Bioworld、CellSignal等品牌都相繼推出小包裝的抗體，這在必定程度上給挑選者更大的挑選自由度，能夠依據(jù)運(yùn)用產(chǎn)品的效價，計算出自己實際需求的抗體量，做到精斷定量收購。
四、關(guān)于品牌的挑選：由于抗體質(zhì)量的異質(zhì)化，關(guān)于抗體的品牌挑選就被我們所重視，可是不論是什么品牌都難免會遇到不合適自己試驗的抗體。所以一般主張考慮那些業(yè)內(nèi)遍及認(rèn)可、購買便利、專業(yè)、售后處理快捷的品牌。一些乃至都沒有正式署理的，只能備選。一起購買時必定要找能夠供給產(chǎn)品輔導(dǎo)、試驗剖析、售后處理的正規(guī)署理商購買，防止由于買到假貨水貨影響試驗。
五、關(guān)于其他一些小細(xì)節(jié)：抗體挑選與運(yùn)用過程中，多少還會遇到一些意想不到的工作。有些細(xì)節(jié)，仍是需求多留意一些。如在挑選做阻斷或中和試驗時，有時需求將抗體加到細(xì)胞培養(yǎng)液中，這是需求留意抗體是否含有疊氮鈉。如果是大包裝的抗體，進(jìn)行分裝是比較節(jié)約的辦法，如果是價的，能夠配成母液再分裝。抗體的短時刻運(yùn)送，用普通冰塊堅持溫度是能夠滿足要求的。別的不要糾結(jié)于WB過程中分子量的問題。許多時分，我們看到相同的抗體，不同的品牌，乃至同一品牌不同的貨號，標(biāo)注的分子量都不一樣。其實可能僅僅生產(chǎn)商只檢測時運(yùn)用了不同的種屬不同的樣品類型，或是參照了不同的文獻(xiàn)，對運(yùn)用者來說，相同的樣品，不論運(yùn)用哪個品牌的，只需抗體是對的，意圖條帶只會出現(xiàn)在相同的方位。關(guān)于分子量的問題，一般不主張看產(chǎn)品闡明，WB中條帶的方位由樣品決議，并不會由于抗體不同而不同。所以在檢測蛋白之前，我們能夠經(jīng)過數(shù)據(jù)庫或參考文獻(xiàn)，對即將檢測的蛋白做個比較全面的了解，包含其可能剪切與潤飾的狀況、表型的狀況等。在*次運(yùn)用一個新的抗體時，不要依據(jù)分子量橫向剪膜，能夠保留幾個全泳道，看看條帶方位或散布的狀況。