假如您的ELISA不幸地碰到了高背景，那么也無需太擔心，依次查看ELISA系統中的組分，并排除可能存在的題目。記住，非特異的抗體結合會增加背景。不外，它的缺點在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。請勿使用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會降低特異結合，產生假陰性。這就降低了可產生信號的抗體非特異結合的機會。目前主要有兩種類型的封鎖液：蛋白和非離子型去污劑。您當然也希望抗體只與目的蛋白結合吧。假如您一直被背景題目所困擾，那么也許您該花些時間來優化封鎖液。
    假如背景過高，而您懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數。這種封鎖液便宜、不亂，在去除洗滌過程中的一些非特異結合上很有用。假如濃渡過高，或者未準確稀釋，則會導致高背景。常用的蛋白封鎖液包括牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。封鎖液的作用是讓不相關的蛋白占據微孔板中潛伏的結合位點。
   ELISA實驗的原理好像很簡樸，不過乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封鎖。假如您的背景過高，懷疑封鎖不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封鎖液，或適當延長封鎖時間。血清組分的內在多樣性可使它有效攔截很多不同類型的分子相互作用。另一個選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封鎖液，后者可協助洗滌過程中的封鎖。解決這個題目的一種方法是使用雞或魚的正常血清。好的封鎖液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發生相互作用。在實驗結束時，我們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于結果的信噪比。