膠原酶的配置及使用

發(fā)布時間： 2013/8/13　　點擊次數(shù)： 1618次

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膠原酶（collagenase）是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的，主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬，內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時，用胰蛋白酶解離細胞的效果較差，這時可采用膠原酶解離細胞法。膠原酶僅對細胞間質(zhì)有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終濃度200U/ml（約為1mg/mL）或0.03%~0.3%。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞膠原酶，要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。

1、膠原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和腎上腺組織細胞的分離。用于消化組織中連接部分使其成為單個細胞，用于哺乳動細胞的分離。
2、膠原酶Ⅳ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它能消化多種組織。
3、膠原酶Ⅴ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離，將結(jié)締組織分離成單個細胞。
4、膠原酶Ⅱ適用于肝臟，骨，甲狀腺，心臟和唾液腺組織。

簡介
膠原酶的配置
膠原酶的使用
膠原酶溶液同胰蛋白酶一樣配制、消毒滅菌和儲藏。
注意：因為Ⅰ型膠原酶分子顆粒比胰酶大，不容易過濾，因此可以用蔡式濾器過濾除菌。
鈣、鎂離子和血清成分不會影響膠原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培養(yǎng)液配制。
1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm3左右小塊
2.將組織塊放入離心管（三角燒瓶）中加入30~50倍體積的膠原酶溶液，旋緊蓋子（密封燒瓶）。
3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內(nèi)，每隔3min振搖一次，如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。
消化時間與組織的類別很有關(guān)系，對于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織，消化時間4~48h，對于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min，也可以根據(jù)具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經(jīng)搖動即成細胞團或單個細胞，可以認為已消化充分。上皮組織經(jīng)膠原酶消化后，由于上皮細胞對此酶有耐受性，可能仍有一些細胞團未*分散，但成團的上皮細胞比分散的單個上皮細胞更易生長，因此，如無特殊需要可以不必再進一步處理。
4.收集消化液（有時含個別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過濾），離心1000r/min，5min，去除上清，用Hanks液或者無血清培養(yǎng)液離心漂洗1~2次，去除上清，加培養(yǎng)液制成細胞懸液，接種培養(yǎng)瓶。

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