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ELISA實(shí)驗(yàn)“溫育”操作是不是只能在37℃條件下完成
發(fā)布時(shí)間： 2016-01-25 點(diǎn)擊次數(shù)： 2350次溫育是ELISA試劑盒測(cè)定中影響測(cè)定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素。ELISA實(shí)驗(yàn)作為一種固相免疫測(cè)定，抗原抗體的結(jié)合反應(yīng)在固相上進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結(jié)合，必須在一定的溫度條件下反應(yīng)一定的時(shí)間。溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對(duì)較短。在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過(guò)程稱(chēng)為溫育(incubation)，也被稱(chēng)之為孵育。這是一個(gè)逐步平衡的過(guò)程，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。
溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度，ELISA試劑盒有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃更為*，在放射免疫測(cè)定中多使反應(yīng)在冰箱中放置一晚上，以形成zui多的沉淀。但因所需時(shí)間太長(zhǎng)，在ELISA中一般不予采用。