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大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒原理和說明書
發(fā)布時間： 2015-01-30 點擊次數(shù)： 1403次大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒原理操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 濃度為0 的S0 號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL 加樣即可。
4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱96孔配置48孔配置備注
微孔酶標(biāo)板12 孔×8 條12 孔×4 條無
標(biāo)準(zhǔn)品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無
生物素1mL 0.5mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個1 個無
注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、20、40、80、160、320 pg/mL
試劑的準(zhǔn)備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20 稀釋，即1 份的20×洗滌緩
沖液加19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5 次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5 次。
大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒原理操作步驟
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3. 待測樣本孔先加生物素10μL，再加待測樣本50μL；
4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5 次（也可用洗板機洗板）。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min 內(nèi)，在450nm 波長處測定各孔的OD 值。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
大鼠睪酮（T）ELISA試劑盒原理試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R 值，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
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